病毒包装服务
在将外源基因导入靶细胞或组织的过程中,病毒的转导效率比真核生物表达载体高很多,特别适合于介导外源基因在难转染甚至无法转染细胞中的表达。
1.慢病毒服务
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点。慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。
图:慢病毒介导的基因过表达原理示意图
图:GFP融合标签的过表达慢病毒感染目标细胞在荧光显微镜下的感染效率
2.腺病毒服务
腺病毒作为进行基因转移和表达的工具,是一种无包膜的双链线性DNA病毒,其直径约为90-100nm,衣壳为廿面体,包含240个六邻体和12个五邻体。基因组长度约为36kb,两端各有一个103bp的反向末站重复序列(ITR),参与病毒DNA的复制,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。
相较于细胞转染和其他病毒运载系统,腺病毒主要具有以下特点:①感染细胞的种类多,覆盖了除抗腺病毒感染的淋巴瘤细胞之外的大部分细胞;②感染细胞的效率高:携带的目的基因表达高效;③病毒可达到的滴度高,我们公司腺病毒滴度能够达到1010pfu/ml,能满足普通细胞实验要求,也能提供高滴度腺病毒,能够达到1011pfu/ml;④制备便捷,扩增容易;⑤无插入致突变性:无需整合在染色体中;⑥病毒保存的稳定性高:-80℃不反复冻融的情况下能够保存两年。
图:腺病毒实验结果示例