酵母系统蛋白表达
     
          酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点,培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉,蛋白翻译后能进行正确加工、修饰、合理的空间折叠,使得蛋白的可溶性得到提高;与昆虫表达系统和哺乳动物表达系统相比,酵母表达系统操作简单,成本低廉,可大规模进行发酵,是较理想的重组真核蛋白质生产制备工具;酵母表达系统包括毕赤酵母表达系统和酿酒酵母表达系统,适合于稳定表达有功能的外源蛋白质。

 

 服务优势

1)可克服大肠杆菌表达系统的不足,进行蛋白质翻译后的修饰合加工;
2)甲醇酵母表达系统具有翻译后加工,适合真核生物基因产物正确折叠的细胞内环境和糖链加工系统;
3)独特的分泌信号序列保证了重组蛋白的大分泌量,目的基因产物在培养液中易于纯化;
4)可选择组成性表达或者诱导表达两种表达体系,X33、GS115、SMD1168等多种菌株和多种载体。

 

服务流程

Fig. 酵母表达技术流程图

重组蛋白制备技术

服务内容 服务周期 内容介绍 交付内容
重组酵母表达质粒构建 基因获取及密码子优化 2 周 1.不同表达载体
2.不同亲和标签
3.分泌或胞内表达
测序报告
克隆至表达载体
质粒测序
大量质粒制备
载体线性化及转化 载体线性化 3~4周 不同表达菌株可选,PCR 鉴定5-10个克隆  
线性化载体电转化
重组高拷贝转化子筛选   5-10个克隆筛选, Zeocin抗生素浓度筛选重组子,结合WB鉴定蛋白表达  
小量表达及纯化(2L) 小量表达、纯化及条件优化 2~4周 优化培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等 1.可行性报告
2.提供0.1-1.0mg样品
SDS-PAGE 及 UV 分析
大量表达及纯化(10L以上)   2~4周 可选择摇瓶或者发酵罐培养 1.纯化蛋白
2.生产信息报告
3.质检报告


应用


 
Fig 1. 重组质粒测序图谱
                                            
                                 Fig 2. 酵母表达载体                                       
Fig 3. 酵母表达纯化PAGE鉴定图