产品名称
通用名称：重组CD34小鼠单克隆抗体试剂（免疫组织化学法）
英文名称：Anti-CD34 Antibody, Recombinant mAb

包装规格
RMAP0A9M1-CD34： 1mL/支

预期用途
RMAP0A9M1-CD34用于通过光学显微镜对石蜡切片中的人类CD34分子进行定性鉴定。任何染色或其缺失的临床解释应通过使用适当对照的形态学研究进行补充，并应在患者的临床病史和其他诊断测试的背景下由合格的病理学家进行评估。

检测原理
免疫组织化学（IHC）染色技术通过加入针对抗原的特异性抗体（一抗）、二抗以及带有显色底物的酶复合物，实现抗原的可视化，其间穿插多个清洗步骤。生色原经酶激活后在抗原位点产生可目视观测到的反应产物。然后标本经复染并盖上盖玻片，在光镜下判读结果，辅助病理生理的鉴别诊断，病理生理操作可涉及或不涉及特异性抗原。

主要组成成份
本品由CD34小鼠单克隆抗体和含叠氮钠防腐剂的组织培养上清液组成。抗体浓度不小于 220.0ug/mL。
每批产品特定的Ig浓度及总蛋白浓度参见瓶标签。

克隆
R4

免疫原
由人类足月胎盘灌注液制备的洗涤剂溶解的囊泡悬浮液。

特异性
人、猴、小鼠、大鼠、猫CD34分子。

Ig类型
Mouse IgG

储存条件及有效期
2℃-8℃条件下贮存。生产日期见产品标签。失效日期见产品标签。有效期36个月。不要冷冻。使用后，立即放回2℃-8℃条件下保存。超过产品标签上指定的有效期后不可使用。
 
适用仪器
适用于染色机（BOND-III, BOND-MAX）,也可手工操作。

样本要求
建议使用10%中性福尔马林缓冲液固定石蜡包埋的组织切片。
 
检测方法
A.自动染色操作建议：
A.1 需要而未提供的试剂：
a) Bond脱蜡液
b) Bond洗液
c) Bond ER 溶液 1
d) 过氧化物封闭液
e) 一抗后封闭液
f) 聚合物
g) DAB色原体
h) DAB底物緩冲液
i) 苏木素
A.2 操作规程：具体操作描述见BOND-III, BOND-MAX仪器说明书。
BOND染色机配备了一组预定义的操作規程，这些操作规程不能被编辑或删除，但您 可以通过复制和编辑现有的操作规程来创建自己的操作规程。
预定义操作规程已经过严格检测和验证，正确使用它们可以得到极好的染色效果。对于您自己创建或编辑的任何用户操作规程，您必须自己负责检测和验证。有能力创建和保存操作规程并不能说明这些操作规程适合于拟定任务。
B.手工操作步骤建议：
B.1需要而未提供的试剂：
a）二甲苯或者二甲苯取代物
b）乙醇
c）pH6抗原决定簇修复液
d）过氧化物酶封闭液
e）蛋白封闭液
f）一抗后封闭液
g）聚合物检测系统
h）DAB色原体
i）DAB底物缓冲液
j）苏木素
B.2 操作步骤：
B.2.1试验釆用Biolight方法,具体描述见说明书。
除非另有规定，否则所有的步骤都在室温（25℃)条件下进行。其操作方法的简单描述如下：
a) 用二甲苯或者二甲苯取代物将切片脱石蜡。
b) 梯度乙醇再水化。
c) 用流动的自来水冲洗玻片。
d) 按照以下程序预处理切片：
在压力锅中加热1.5L建议的修复溶液到沸腾。加盖，但不锁紧盖子。将玻片放置在金属染色架上（不要将玻片放得很紧凑，因为可能会发生不均匀的染色)，染色架放在压力锅内，确保玻片己完全浸没在修复溶液中，锁上盖子。当压力锅到达操作温度和压力时，定时15分钟（除非在使用建议中另有规定为将压力锅从热源上移开，在盖子关闭的情况下用冷水冲洗。请不要打开盖子，直到指示器显示其压力己完全释放。 打开盖子，移出玻片，将玻片立即放置在冷的自来水中。
e) 用去离子水冲洗玻片。
f) 过氧化物封闭液中和内源过氧化物酶。
g) 用TBS冲洗两次，每次五分钟。
h) 用蛋白封闭液孵育5分钟。
i) 用TBS冲洗两次，每次五分钟。
j) 用最佳稀释度（推荐一抗稀释度为：1：100,用户应自行建立本实验室的最佳一抗稀释度)的一抗孵育30分钟。
k) 用TBS冲洗两次，每次五分钟。
l) 用一抗后封闭液孵育30分钟。
m) 用TBS冲洗两次，毎次五分钟。
n) 在NovoLink聚合物检测系统中孵育30分钟。
o) 用TBS冲洗一次，每次五分钟，同时轻轻振摇。
p) 用DAB工作液（见DAB工作液）显色过氧化物活性5分钟。
q) 用水冲洗玻片。
r) 用苏木精复染。
s) 用水冲洗玻片5分钟。
t) 脱水、透明化处理并固定切片。
DAB工作液
取50 uL DAB色原体加入到1 ml Biolight DAB底物缓冲液（聚合物），使用前6小时内制备。
了解更多的产品信息或者需要支持，可以联系Biolight当地分销商或者区域办公室，或者访问 Biolight 网站 http://biolight.wellanimal.com/
 
质量控制
使用者实验室中组织处理和技术方法的差异会导致测定结果的显著差异，因此需要使用以下方法进行常规内部控制对照。
对照必须使用新鲜的尸体解剖/活组织检査/外科样品，并尽快按照与患者样品相同的方式进行福尔马林固定、组织处理及石蜡包埋。
 
阳性组织对照
用于显示组织制备和染色技术正确恰当。
每次染色中实验组检测条件应包括一个阳性组织对照。
弱阳性染色的组织比强阳性染色的组织更适合用于优化质量控制，并透于检测低水平的试剂降解¹。
所建议的阳性对照组织为肝脏/阑尾。 如果阳性组织对照不能呈现阳性染色，可认为试验组织的染色结果无效。

阴性组织对照
应在阳性组织对照后使用，以通过一抗标记目标抗原的特异性。
此外，大多数组织切片中多种不同的细胞类型可作为阴性对照位点，但这应由使用者来自行证实。
若存在非特异性染色，通常有弥散性。福尔马林过度固定组织切片中也可观察到零星染色的结缔组织。使用完整细胞进行染色结果的判读坏死或者变性的细胞通常为非特异性染色2。假阳性结果可能是由于蛋白质或者底物反应产物的非免疫结合而产生，假阳性也可以是由内源性醇类引起，如假性过氧化物(红细胞)、内源性过氧化物醇(细胞色素C) 或者内源性生物素(如，肝脏、乳房、脑和肾脏)，这取决于所用的免疫染色类型。为了将内源性酶活性或者酶的非特异性结合与特异性免疫反应相区分，额外的患者组织可以分别用底物生色原或者酶复合物(抗生物素蛋白-生物素、链霉亲和素、标记的聚合物)和底物-生色原进行染色。如果在阴性组织对照中发生特异性染色，则可认为患者组织的染色结果无效。

阴性试剂对照
对每位患者的切片用非特异性阴性试剂对照替代一抗进行染色，以评价非特异性染色，可以对抗原位置的特异性染色进行更好地判读。

检测结果的解释
患者组织
检查用RMAP0A9M1染色的患者样品，阳性染色强度应以阴性试剂对照的非特异性背景染色为依据来进行评估。与任何免疫组化检测一样，阴性结果表示未检测到抗原，而不是表示在所分析的细胞/组织中没有抗原。必要时可使用一组抗体，以识别假阴性反应。
正常组织
本品可以检测多种正常组织中血管内皮细胞质中的内皮细胞标记物(CD34)。（经评估的正常病例总数，=57）。
异常组织
本品染色27/137异常组织评估，包括皮肤肿瘤（13/67，包括9/10例皮肤纤维肉瘤、2/3恶性神经鞘瘤、1/15恶性黑色素瘤、0/16鳞状细胞癌、0/14例基底细胞癌、0/10汗腺癌、0/3转移性腺癌、0/2腺样囊性癌、0/1皮脂腺癌、0/1多形性未分化肉瘤和0/1平滑肌肉瘤）、肾癌（17/30）、急性淋巴母细胞白血病（6/10）、卡波西肉瘤（4/4）、软组织肿瘤（2/4，包括1/1血管肉瘤、1/1血管瘤、0/1神经节神经瘤和0/1纤维瘤）、卵巢肿瘤(1/4、包括1/1生殖细胞瘤、0/2腺癌和0/1透明细胞癌）、化脓性肉芽肿（1/1）、甲状腺乳头状癌（0/4）、肝肿瘤（0/5）、乳腺癌（0/2）、喉鳞状细胞癌（0/1）和胸腺非典型类癌（0/1）（评估病例总数=137）。

RMAP0A9M1推荐用于检测正常和肿瘤组织中的人CD34蛋白，作为使用免疫组织化学染色的常规组织病理学的辅助手段。

肾癌组织染色结果图例如下： 检测方法的局限性
免疫组化是一种多步骤的诊断方法，包括适当试剂选择的专业培训，组织选择、固定 和处理，IHC玻片的制备以及染色结果的判读。
组织染色依赖于染色前组织的操作和处理。不透当地固定、冷冻、解冻、冲洗、干燥、 加热、切片，或者被其他组织或者液体污染都可能产生假象、抗体捕获或者假阴性结果。固定和包埋方法的变化或者组织中的自身不规则性也可产生不一致的结果过度或者不完全的复染可影响正确的结果判读。
任何染色或者未染色的临床判读应辅以适当对照的形态学研究，并应由有资质的病理医生根据患者的临床病史和其他诊断检测进行评价。
博乐莱生物的抗体按照规定用于有特殊固定要求的石蜡包埋切片。也可能会发生意外的抗原表达，尤其是在肿瘤组织中。任何染色组织切片的临床判读必须包 括形态学分析及相应对照的评价。

产品性能指标
1.特异性：本品可以检测多种正常组织中血管内皮细胞质中的内皮细胞标记物(CD34)，也能使癌细胞染色.
本品染色了 13/67例皮肤肿瘤、17/30例肾癌。
2.重复性
使用三批抗体、在三个不同时间内在阳性组织的三个切片上的染色符合CD34表达的预期分布，在阴性组织中无染色。
 
注意事项
该试剂采用细胞培养的上清液制备。由于本产品为生物制品，操作时应适当注意。
试剂含有叠氮化钠。根据要求可获得叠氮化钠的材料安全数据表（MSDS）,也可以登录http://biolight.wellanimal.com/获得材料安全数据表。
任何可能具有毒性的成分请依据当地法规进行处理。
固定前后的样本以及所有与样本接触的材料都应视为有传染性的物质来操作，并小心处理不要用嘴吸移液管来移取试剂，并避免试剂和样本与皮肤和粘膜接触。如果试剂或者样本与敏感部位接触，用大量的水进行冲洗。并尽快就医。
尽量减少微生物污染，否则可能会引起非特异性染色。
推荐以外的孵育时间或者温度可能会产生错误的结果。任何类似的变更必须由使用者自行验证。
请在使用前检査包装的完整性。

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