产品名称：免疫组化试剂盒（抗兔二抗）
          产品编号：BLRE006
          产品规格：

产品组成	BLRE006-200T	BLRE006-1000T
DAB稀释液	12.5 mL	62.5 mL
50×DAB原液	250 μL	1.25 mL
HRP标记山羊抗兔二抗	100 μL	500 μL

说明书

产品情况：本试剂盒为高灵敏度的两步法免疫组化试剂盒，适用于一抗来源为兔的抗体的后续显色。试剂盒中包含辣根过氧化物酶HRP偶联标记的山羊抗兔IgG与DAB；在WB、IHC实验中，HRP标记的山羊抗兔二抗与兔来源一抗（先与抗原反应）结合后，再与DAB反应。DAB是辣根过氧化物酶（HRP）的反应底物，在HRP的催化下，DAB产生棕色沉淀，实现信号放大和显色。

储存运输：冰袋运输；DAB稀释液和50×DAB原液4℃保存，二抗-20℃保存；有效期12个月。

注意事项：
（一）如果免疫组化显色时出现背景过深的情况，可考虑选择以下操作：延长洗涤时间，使用适当的封闭液进行封闭，灭活内源性过氧化氢酶，缩短显色时间，降低二抗浓度等；
（二）如果免疫组化出现没有显色或显色太浅的情况，可考虑选择以下操作：适当提高一抗、二抗浓度，延长显色时间，其次检测二抗是否被正常显色；
（三）DAB对人体有害，操作时请小心做好防护，避免直接接触人体或吸入体内。

实验流程：
（一）准备工作
1. 自备PBS、梯度酒精、二甲苯、封片剂、细胞核复染试剂（推荐苏木素染液BLRE004、苏木素分化液BLRE025、苏木素返蓝液BLRE026）等；
2. 二抗工作液配制：使用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀释HRP标记山羊抗兔二抗，得到二抗工作液。按需配制，现配现用，保存时间不多于48 h；
3. DAB显色工作液配制：20 μL 50×DAB原液加入1 mL DAB稀释液中，混匀备用。按需配制，现配现用。
（二）实验步骤
1. 按照常规免疫组化步骤，组织切片经前期脱蜡、抗原修复、封闭、一抗孵育后，经PBS洗三次，每次5 min；
2. 二抗孵育：每张切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆盖组织，室温孵育30-60 min。经PBS洗三次，每次 5min；
3. DAB显色：每张切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室温孵育数分钟，通过显微镜下观察控制显色至预期效果后，立即水洗终止显色；
4. （可选）细胞核复染：切片经苏木素染液染色3-5 min，自来水洗；经苏木素分化液快速分化3-5 s，自来水洗；自来水冲洗返蓝或经苏木素返蓝液返蓝3-5 s；
5. 封片：切片按常规步骤经梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
 
本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断！