产品名称:免疫组化试剂盒(抗小鼠二抗)
产品编号:BLRE147
产品规格:
产品组成 | BLRE147-200T | BLRE147-1000T |
DAB稀释液 | 12.5 mL | 62.5 mL |
50×DAB原液 | 250 μL | 1.25 mL |
HRP标记山羊抗小鼠二抗 | 100 μL | 500 μL |
说明书 |
产品情况:本试剂盒为高灵敏度的两步法免疫组化试剂盒,适用于一抗来源为小鼠的抗体的后续显色。试剂盒中包含辣根过氧化物酶HRP偶联标记的山羊抗小鼠IgG与DAB;在WB、IHC实验中,HRP标记的山羊抗小鼠二抗与小鼠来源一抗(先与抗原反应)结合后,再与DAB反应。DAB是辣根过氧化物酶(HRP)的底物,在HRP的催化下,DAB产生棕色沉淀,实现信号放大和显色。
储存运输:冰袋运输;DAB稀释液和50×DAB原液4℃保存,二抗-20℃保存;有效期12个月。
注意事项:
(一)如果免疫组化显色时出现背景过深的情况,可考虑选择以下操作:考虑延长洗涤时间,使用适当的封闭液进行封闭,灭活内源性过氧化氢酶,缩短显色时间,降低二抗浓度等;
(二)如果免疫组化显色时出现没有显色或显色太浅的情况,可考虑选择以下操作:适当提高一抗、二抗浓度,延长显色时间,其次检测二抗是否被正常显色;
(三)DAB对人体有害,操作时请小心做好防护,避免直接接触人体或吸入体内。
实验流程:
(一)准备工作
1.自备PBS、梯度酒精、二甲苯、封片剂、细胞核复染试剂(推荐苏木素染液BLRE004、苏木素分化液BLRE025、苏木素返蓝液BLRE026)等;
2.二抗工作液配制:使用PBST(pH 7.2-7.4)以1:200比例稀释HRP标记山羊抗小鼠二抗,
得到二抗工作液。按需配制,现配现用,保存时间不多于48 h;
3.DAB显色工作液配制:20 μL 50×DAB原液加入1 mL DAB稀释液中,混匀备用。按需配制,现配现用。
(二)实验步骤
1.按照常规免疫组化步骤,组织切片经前期脱蜡、抗原修复、封闭、一抗孵育后,经PBS洗三次,每次5 min;
2.二抗孵育:每张切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆盖组织,室温孵育30-60 min。经PBS洗三次,每次 5min;
3.DAB显色:每张切片上滴加50-100 μL DAB工作液,室温孵育数分钟,通过显微镜下观察控制显色至预期效果,然后立即水洗终止显色;
4.(可选)细胞核复染:切片经苏木素染液染色3-5 min,自来水洗;经苏木素分化液快速分化3-5 s,自来水洗;自来水冲洗返蓝或经苏木素返蓝液返蓝3-5 s;
5.封片:切片按常规步骤经梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
本产品仅供科研使用,不得用于临床诊断!