产品名称：超强高保真PCR试剂盒
产品规格：5mL
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说明书 |
产品情况：Ultra HiFidelity PCR Kit是一种新型高保真PCR扩增预混液，适用于PCR相关的克隆和检测。扩增预混液中的Ultra HiFi DNA Polymerase是通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真DNA聚合酶，增强了DNA聚合酶对模板的亲和力，使得此酶在扩增速度和延伸能力上得到了提升，增加了PCR成功率和产物量。同时，此酶具有优良的3’- 5’外切酶活性（Proofreading活性），保真性可达市场上主流产品水平，保证了基因和文库扩增过程中的真实性。此外，本产品中的DNA聚合酶具有热启动（Hot Start）功能，可有效的控制低温情况下的非特异扩增和酶活损耗，进而保证了PCR扩增的特异性和稳定性。
本产品为一管式预混Mix形式，内含热启动型的Ultra HiFi DNA Polymerase、超纯dNTPs、MgCl2、反应缓冲液等PCR反应所需组分，只需加入模板和引物即可进行PCR扩增反应，操作简便。除此之外，本产品中还整合了PCR Enhancer组分，可以提高Ultra HiFidelity PCR Kit对PCR反应抑制剂的耐受能力和对不同GC含量模板的适应能力，因此可以在扩增高级结构复杂的产物和PCR抑制剂含量较高的PCR体系时添加使用。
储存运输：-20℃保存，一年有效。
注意事项：
1.为了您的健康安全，请穿戴实验服且佩戴一次性手套进行操作。
使用方法：
① PCR反应液的配制：
1. 将2×UltraHiFi Mix (with dye)、引物、模板和ddH2O于室温条件下（15-25℃）融化，混匀，简短离心后于冰盒上备用。
2. 按照下表体系进行PCR反应体系的配制：
| 组分 | 50µl反应体系加入量 | 反应浓度 |
| DNA Template | Variable ** | - |
| Primer F* (10 µM) | 1.25 µL | 0.25 µM |
| Primer R* (10 µM) | 1.25 µL | 0.25 µM |
| 2×UltraHiFi Mix (with dye) | 25 µL | 1× |
| PCR Enhancer*** (if needed) | 10 µL | 1× |
| ddH2O | To 50 µL | - |
*引物终浓度为0.25 µM时可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。扩增效率不高时，可增加PCR反应体系中的引物浓度；适当减少PCR反应体系中的引物浓度则可以增加PCR反应特异性。如有必要，可以在0.2-1.0 µM间进行优化选择。
**模板DNA用量请参照如下（50 µl PCR反应体系）：
| 模板类型 | 模板用量范围 | 推荐模板用量 |
| 基因组DNA | 1-1000 ng | 100-500 ng |
| 质粒DNA | 0.01-100 ng | 1-10 ng |
| cDNA | 1-200 ng | 50-100 ng |
| λDNA | 0.01-100 ng | 1-10 ng |
3. 按步骤2中建议模板及引物用量加入模板、引物和ddH2O，混匀后上机进行PCR反应。
② PCR反应条件：
1. 使用2×UltraHiFi Mix (with dye) 进行扩增反应时，请先使用三步法。
注：进行三步法扩增时，按延伸速度按照10-15 sec/kb进行设定；对于DNA长度≥10 kb的模板或复杂模板，可将延伸时间延长至30 sec/kb。下述反应程序仅供参考，实际情况下，客户可按照自身情况进行更改和调整。
三步法反应程序参考如下：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 1 | 94℃ | 2min | 1 |
| 2 | 98℃ | 10sec |
35 |
| 3 | 60℃ | 30sec | |
| 4 | 68℃ | 10-15sec/kb | |
| 5 | 68℃ | 5min | 1 |
| 6 | 4℃ | Hold | 1 |
2. 当扩增产物出现杂带或弥散时，请尝试两步法或降落PCR（Step down PCR）。
两步法反应程序参考如下：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 1 | 94℃ | 2min | 1 |
| 2 | 98℃ | 10sec | 35 |
| 3 | 68℃ | 10-15sec/kb | |
| 4 | 68℃ | 5min | 1 |
| 5 | 4℃ | Hold | 1 |
3. 结果检测：反应结束后取5 µl反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
注：2×UltraHiFi Mix (with dye) 中已添加电泳指示剂，无需额外添加Loading Buffer。
③ 扩增模板类型及长片段扩增举例：
有记录的样品适用范围和扩增长度如下表所示：
| 模板类型 | 有记录的长片段扩增 |
| 人基因组DNA | -8kb |
| 大鼠基因组DNA | -8kb |
| 大肠杆菌基因组DNA | -8kb |
| 玉米基因组DNA | -8kb |
| 麦基因组DNA | -8kb |
| 水稻基因组DNA | -8kb |
| λDNA | -15kb |
| cDNA | -6kb |
本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断！