产品名称：游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒
产品编号：BLGE297
产品规格：
| 产品组成 | 组分名称 | BLGE297-100T |
| 自备溶液 | FFA试剂一 | 50 mL×1 瓶 |
| BLGE297-1 | FFA提取液 | 100 mL×1 瓶 |
| BLGE297-2 | FFA试剂二 | 20 mL×1 瓶 |
| BLGE297-3 | FFA试剂三 | 粉剂×2 瓶 |
| BLGE297-4 | FFA标准品 | 粉剂×1 支 |
| 说明书 | 1份 | |
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说明书 |
产品情况：游离脂肪酸，也称为非酯化脂肪酸，在与白蛋白结合的血浆中循环。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。
用有机溶剂萃取 FFA，含有 FFA 的有机液与三乙醇胺铜反应，在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA - Cu，Cu 离子与显色液反应形成紫红色络合物，反应形成的颜色深浅与 Cu 离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律，因此可利用此反应进行比色。
检出限：0.0390 μmol/mL
线性范围：0.05 - 2 μmol/mL
储存运输：试剂盒在2 - 8 ℃干燥室温条件下，可保存6个月；冰袋运输。
注意事项：
（一）使用前请核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系技术支持；
（二）实验前建议选择 2 - 3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测；
（三）试剂三应尽量晚配，可在操作到加入试剂二时，再配制试剂三；
（四）必须保证每管的震荡频率及时间一致；
（五）尽量在 30 min 内完成测量；
（六）上层溶液不可直接加入到 96 孔板内，需与试剂三混匀，并且测完后要密封好再丢弃；
（七）检测试剂多数为有机溶剂，因此同一吸头多次吸取会造成体积不准，建议及时更换吸头。
实验流程：
（一）自备仪器和用品
50 mL玻璃瓶1个、10 mL 玻璃瓶1个、正庚烷、无水甲醇、氯仿、无水乙醇、蒸馏水、研钵/匀浆器、冰盒、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板。
（二）实验前准备
试剂一：实验前一天配制；取50 mL带盖玻璃瓶1个，按照正庚烷：无水甲醇：氯仿=24:1:25 的比例配置（自备），盖紧后混匀；
试剂三：临用前（尽量晚配）每瓶加入 13 mL 无水乙醇充分溶解，4℃可保存一周；
标准品：临用前将粉末转移到 10 mL 玻璃瓶中，加入 7.8 mL 氯仿充分溶解，即为 5μmol/mL 的棕榈酸标准溶液，4℃保存。
（三）样本处理（可适当调整待测样本量）
1. 血清中 FFA 测定：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3500 rpm 离心 15 min，取上层血清置于 4℃冰箱保存，待测；
2. 组织中 FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约 0.1 g，加入 1 mL 提取液，匀浆后，8000 rpm，4℃离心 10 min，取上清液，置冰盒上待测。
（四）操作步骤（尽量在 30 min 内完成测量）
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm，无水乙醇调零；
2. 试剂二在 37℃水浴中预热 30 min 以上；
3. 标准品的稀释：将标准品用氯仿稀释成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL；
4. 按下表在 1.5mL 离心管中加入相应试剂；
| 对照管 | 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
| 蒸馏水（μL） | 30 | |||
| 样本（μL） | 30 | |||
| 氯仿（μL） | 30 | |||
| 标准品（μL） | 30 | |||
| 试剂一（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 试剂二（μL） | 120 | 120 | 120 | 120 |
| 充分振荡10min后，3000rpm，离心10min（保证每管的震荡频率及时间一致） | ||||
| 上层溶液（μL） | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 试剂三（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 充分振荡 2 min 后，静置 15 min，取 200 μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中，在 550 nm 下测吸光值，分别记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管。（对照管和空白管各只做 1 - 2 管） | ||||
1. 标准曲线的绘制：
以标准溶液的浓度为x轴，以ΔA标准（ΔA=A标准管-A空白管）为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将ΔA（ΔA=A测定管-A对照管）带入方程得到x。
2. 血清FFA含量：
FFA 含量（μmol/L）=1000x
3. 组织FFA含量：
(1) 按样本蛋白浓度计算
FFA 含量（μmol/mg prot）=x×V样总÷（Cpr×V样总）=x÷Cpr
(2) 按样本质量计算
FFA 含量（μmol/g 质量）=x×V样总÷W
V样总：上清总体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：单位换算系数，1L=1000mL。
六、实验实例
1. 取小鼠血清进行样本处理，按照操作步骤，使用 96 孔板测得 A 对照管=0.108、A 测定管=0.310、ΔA=A测定管-A 对照管=0.310-0.108=0.202，代入标准曲线 y =0.6679x+0.019，计算 x=0.274，按血清含量计算：FFA 含量（μmol/L）=1000x=1000×0.274=274 μmol/L。
本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断！