产品名称：细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
产品规格：50T
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说明书 |
产品情况：细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。PI是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的，对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能透过细胞膜而使细胞核染上。因此，可以采用 Annexin V 与 PI 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。
储存运输：2-8℃避光保存，一年有效。
注意事项：
1.包括漂浮在培养基上的细胞，一起收集。
2.洗细胞后，建议轻轻摇匀细胞沉淀，避免使用加液枪，以免由于塑料枪头的使用造成细 胞损失。
3.一次检测很多样本，加入PI应该有一定的时间间隔（一般以30~60s为宜），因为PI 本身有毒。
4.为了您的健康安全，请穿戴实验服且佩戴一次性手套进行操作。
使用方法：
1. 细胞样品的准备：
a)对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含 EDTA 的胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm 左右离心 5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50µL 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1mL 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。
b)对于悬浮细胞：1000rpm 左右离心 5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50µL 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1mL 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。
2. 用去离子水按 1:9 稀释 Binding Buffer (2mL 10x Binding Buffer+18mL 去离子水)；
3. 用 1x 结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为 1-5×106/mL；
4. 取 100µL 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5µL Annexin V/FITC 混匀后于室温避光孵育 5 分钟；
5. 加入 5µL 的碘化丙锭溶液(PI)，并加 400µL PBS，立刻进行流式或荧光显微镜检测。
本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断！