产品编号：BLRE149

产品规格：

产品组成		BLRE149
试剂A：TRAP固定液		50 mL
试剂B： TRAP孵育液	B1：AS-B1染色液	1 mL
	B2：GBC染色液	0.1 mL
	B3：TRAP缓冲液	9 mL
临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。
试剂C：苏木素染色液		10 mL
试剂D：甲基绿染色液		10 mL
说明书		1份

产品情况：酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷脂酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷脂酶各有不同，酸性磷脂酶的适宜pH为4.5~5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid phosphatase , TRAP）均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。

储存运输：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。

注意事项：
（一）TRAP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色；
（二）对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间；
（三）样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性；
（四）组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24 h，否则酶活性会减弱或消失；
（五）组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52~54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失；
（六）不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯；
（七）实验过程中请穿实验服并戴一次性手套，确保安全；
（八）本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

使用方法：自备材料：蒸馏水、恒温箱、载玻片、推玻片、光学显微镜。
操作步骤：（仅供参考）
（一）血液、细胞涂片：
1. 推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载玻片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止；
2. 自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s~3min，多数情况下30~60s即可；
3. 水洗，稍微晾干（不宜过分干燥）；
4. 切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45~60min，水洗；
5. 复染：苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色2~3min；
6. 水洗、晾干、镜检。
（二）冰冻切片：
1. 冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1~2min；
2. 自然晾干，TRAP固定液4℃固定1~3min；
3. 水洗，稍微晾干（不宜过分干燥）；
4. 切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45~60min，水洗；
5. 复染：苏木素染色液染色5~8min或甲基绿染色液染色2~3min；
6. 水洗、晾干、镜检。
（三）石蜡切片：
1. 石蜡切片脱蜡5~10min，重复一次；
2. 无水乙醇5min，90%乙醇和70%乙醇各2min；
3. 水洗2min；
4. 自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s~3min，多数情况下30~60s即可；
5. 水洗，稍微晾干（不宜过分干燥）；
6. 切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，浸染45~60min，水洗；
7. 复染：苏木素染色液染色5~8min或甲基绿染色液染色2~3min；
8. 水洗、晾干、镜检。

染色结果分析：
染色结果：

阳性颗粒	紫红色
细胞核	蓝色（苏木素）或绿色（甲基绿）

临床意义：
1.毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸控制，其他细胞均呈阴性或极弱阳性；
2.急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP反应不一；
3.T淋巴细胞ACP染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性；
4.戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断！