瞬时表达
     
          HEK293表达系统可在哺乳动物细胞中进行快速的超高得率蛋白制备,该系统基于该细胞在特定表达培养基上的高密度培养。我们自主研发的转染试剂与经优化的稀释体系相结合,进行瞬时表达,可使蛋白表达量大幅度提高。
         CHO细胞表达系统可分为瞬时表达和稳定表达两大体系,哺乳动物细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能,其表达的重组蛋白在分子结构、理化性质和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子,更有可能获得与天然分子相同的生物活性,可在短期内获得一定量的可溶性蛋白,同时可以满足标签切除、活性测定、HPLC检测等,可用于基因产物的快速表达和小规模制备蛋白等方面。目前,瞬时表达技术广泛应用于疾病诊断、抗体生产、疫苗开发等多个领域,为客户提供灵活优质的服务。

 

 服务优势 

1)低成本、高效的表达载体;
2)优化的哺乳动物表达系统;
3)翻译后修饰和正确折叠的高产量表达;
4)丰富稳定的细胞系培养及开发经验。

 

服务流程

 

Fig. 哺乳动物细胞瞬时转染表达流程图

 

服务周期

技术内容 周期 交付内容
基因合成及密码子优化(可选) 1-2周  
载体构建 克隆至优化的表达载体 1-2周 1.测序报告
2.质粒鉴定报告
质粒测序
大量质粒制备
表达及纯化 细胞传代培养 1-2周 1.可行性报告
2.如表达可行,且QC检测后有剩余样品,提供0.1-0.5mg样品
瞬时转染HEK293/CHO细胞
蛋白纯化
SDS-PAGE及UV分析
大量表达及纯化(可选) 1-2周 1.纯化蛋白
2.SDS-PAGE报告
3.质检报告
 

应用

 

Fig. 瞬时转染哺乳动物细胞纯化page图(Lane4和Lane5)

   

稳定表达

           与瞬时转染不同,稳定细胞系构建是指外源基因进入受体细胞并整合到细胞的染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因,经过抗生素加压筛选后最终得到可以稳定表达蛋白的细胞株。从技术流程上看,稳定细胞株的转染流程是以瞬时转染为基础,先转染哺乳动物细胞,再对细胞池筛选得到稳定的细胞系,剔除未稳定整合的细胞,得到有限稀释的单克隆稳定转染细胞株。
           稳定细胞系广泛应用于重组蛋白和抗体的生产、检测分析、基因编辑、功能研究等各个领域,表达的蛋白、抗体稳定性更高,批次差异更小。我们的Free Style CHO-S表达系统对培养基、转染试剂及稀释体系等条件进行了多方面的优化,解决了转染后的细胞易出现细胞结团的问题。

 

服务优势

1)细胞来源明确,无污染;
2)直接连续培养,无需转染;
3)可更高密度培养;
4)稳定表达蛋白与基因工程抗体;
5)比瞬时转染得到的蛋白更稳定,批间差更小;
6)GS-MSX基因共扩增技术,外源基因的拷贝会增加至几百至几千产量更高;
7)丰富稳定的细胞系培养及开发经验。

 

服务流程

 


 

Fig. 哺乳动物细胞瞬时转染表达流程图
 

服务周期

服务内容 周期 交付内容
基因合成及密码子优化(可选) 1~2周  
载体构建 克隆至表达载体 1~2周
1.测序报告
2.质粒鉴定报告
质粒测序
大量质粒制备
瞬转表达评估 瞬时表达 2周 1.评估报告
ELISA或WB检测表达水平
稳定细胞株开发 稳定转染及筛选 12~20周
1.表达报告
2.2~3 株稳定克隆 (可选)
MTX 扩增及筛选
高表达克隆筛选及稳定性筛选
细胞建库
大量表达及纯化(可选) 2~3 周
1.纯化蛋白
2.SDS-PAGE 报告
3.质检报告