酵母系统蛋白表达
酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点,培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉,蛋白翻译后能进行正确加工、修饰、合理的空间折叠,使得蛋白的可溶性得到提高;与昆虫表达系统和哺乳动物表达系统相比,酵母表达系统操作简单,成本低廉,可大规模进行发酵,是较理想的重组真核蛋白质生产制备工具;酵母表达系统包括毕赤酵母表达系统和酿酒酵母表达系统,适合于稳定表达有功能的外源蛋白质。
服务优势
1)可克服大肠杆菌表达系统的不足,进行蛋白质翻译后的修饰合加工;
2)甲醇酵母表达系统具有翻译后加工,适合真核生物基因产物正确折叠的细胞内环境和糖链加工系统;
3)独特的分泌信号序列保证了重组蛋白的大分泌量,目的基因产物在培养液中易于纯化;
4)可选择组成性表达或者诱导表达两种表达体系,X33、GS115、SMD1168等多种菌株和多种载体。
服务流程
Fig. 酵母表达技术流程图
重组蛋白制备技术
服务内容 | 服务周期 | 内容介绍 | 交付内容 | |
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重组酵母表达质粒构建 | 基因获取及密码子优化 | 2 周 |
1.不同表达载体 2.不同亲和标签 3.分泌或胞内表达 |
测序报告 |
克隆至表达载体 | ||||
质粒测序 | ||||
大量质粒制备 | ||||
载体线性化及转化 | 载体线性化 | 3~4周 | 不同表达菌株可选,PCR 鉴定5-10个克隆 | |
线性化载体电转化 | ||||
重组高拷贝转化子筛选 | 5-10个克隆筛选, Zeocin抗生素浓度筛选重组子,结合WB鉴定蛋白表达 | |||
小量表达及纯化(2L) | 小量表达、纯化及条件优化 | 2~4周 | 优化培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等 |
1.可行性报告 2.提供0.1-1.0mg样品 |
SDS-PAGE 及 UV 分析 | ||||
大量表达及纯化(10L以上) | 2~4周 | 可选择摇瓶或者发酵罐培养 |
1.纯化蛋白 2.生产信息报告 3.质检报告 |
应用
Fig 1. 重组质粒测序图谱
Fig 2. 酵母表达载体
Fig 3. 酵母表达纯化PAGE鉴定图