二抗选择指南
抗体
也叫免疫球蛋白 (Ig)，是一种能特异性结合抗原的糖蛋白，而抗原是在易感染动物体内引发抗体产生的物质。在体内抗体是由于外源性分子的侵袭而产生。抗体以一个或者多个 Y 字形单体存在，每个 Y 字形单体由 4 条多肽链组成，包含两条相同的重链和两条相同的轻链，轻链和重链是根据它们的分子量大小来命名的。Y 字形结构的顶端是可变区，为抗原结合部位。
任何一个抗体的轻链都可以分为κ或λ型（基于小分子多肽结构上的差异），每一个抗体的重链则决定了它的类或型。
重链
哺乳动物Ig的重链一共有五种，分别用希腊字母α、δ、ε、γ和 μ 来命名，相对应组成的抗体就称为 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM 五种抗体。不同的重链在大小和组成上有所区别，α和γ包含大约450个氨基酸，而μ和ε则有大约550个氨基酸。
轻链
哺乳动物只有两种轻链：λ型和κ型。每条轻链有两个前后相连的结构域：一个恒定区和一个可变区。轻链的长度大约为 211~217 个氨基酸，每个抗体包含的两条轻链总是相同的，对哺乳动物来说每一个抗体中的轻链只有一个型：κ或λ型。
Fab和Fc段
Fc 段，也称恒定区，可以直接结合酶或荧光染料来标记抗体，是在 ELISA 过程中抗体铆钉在板上的部位，也是在免疫沉淀、免疫印迹和免疫组化中识别并结合二抗的部位。
Fab段，也称可变区，正是这个区域特异性地识别抗原的表位。
二抗
一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体，即抗体的抗体。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。二抗可以耦联有几种不同的标记，可以是酶，荧光素，或生物素。
由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。
要选择出一种最适用于您的应用和研究的最佳二抗，建议考虑以下因素：
1. 种属来源和种属反应性
种属来源是指制备抗体的物种。主要根据一抗种属来源决定二抗种属来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。所用二抗的种属来源必须不同于一抗的种属来源和反应种属。例如，如果一抗来源于兔，则不能使用来源于兔的二抗。
2．抗体的类别或亚型
二抗必须与一抗的类别或亚类相匹配。
多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴，并且是 IgG 同型。因此，二抗通常为抗 IgG H&L（重链和轻链）抗体。
单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。例如，如果单克隆一抗为小鼠 IgG1，则需要抗小鼠 IgG 二抗，或者特异性较低的 F(ab) 片段抗小鼠 IgG 二抗。
3．完整抗体还是抗体片断
整个IgG分子：此种抗体适用于多数情况。
F(ab')2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。
Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。
4．二抗的偶联标记
一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC，RRX，TR，PE）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA，常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（组织免疫化学，细胞免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。
5．纯化方法
大多数二抗从经过免疫的动物血清纯化获得。亲和纯化是指将含有抗体的血清通过固相配体的多孔纯化树脂柱。亲和配体会与抗体互相结合，之后血清中其他未结合的成分可经过漂洗步骤去除，最后使用一种可破坏配体-抗体相互作用的缓冲液将抗体从树脂柱上洗脱并回收（即纯化抗体）。这种类型的纯化方法是通过使用可识别抗体的配体（如蛋白G）或可被抗体识别的配体（如目标抗原）来实现的。
使用蛋白G作为亲和配体可纯化血清中的所有抗体（主要是IgG），而不区分其抗原特异性。使用目标抗原作为亲和配体仅纯化血清中的抗原特异性抗体（任意亚型的免疫球蛋白）。